流式檢測
一、項目介紹
流式細胞術是運用流式細胞儀對細胞或顆粒進行光譜鑒定、細胞分選、計數，廣泛用于分析細胞表面和細胞內分子的表達水平、鑒定樣品中細胞群的不同細胞類型、評估各細胞亞群的純度以及分析細胞大小和內含顆粒。主要利用熒光標記的抗體檢測蛋白水平，或結合了特定細胞分子的熒光染料，如PI與 DNA 的結合。
二、應用
常用于細胞表面分子如表面標記物的鑒定及水平分析，以鑒定、定性或定量特定類群的細胞，可以檢測細胞內蛋白表達水平，可以利用特定染料分析細胞周期、細胞凋亡，利用線粒體電位染料分析線粒體膜電位，利用DHE等染料檢測細胞內ROS水平。
三、流式細胞儀通道
流式細胞儀Beckman Coulter CytoFLEX；光學參數：FSC（前散射）、SSC（側散射）、4色熒光通道；數據采集軟件：CytExpert。
| 激發(fā)波長 | 通道 | 發(fā)射波長 | 常見染料 |
| 488 nm | FL1 | 525±20 nm | FITC、EGFP、CFSE、AlexaFluor 488 |
| FL2 | 585±21 nm | PE、PI、DsRed | |
| FL3 | 690±25 nm | PerCP-Cy5.5、PC5 | |
| 638 nm | 660±10 nm | APC、Alexa Fluor 647 | |
四、結果展示
細胞周期
細胞凋亡
ROS檢測
JC-1線粒體膜電位
五、樣品保存運輸
1、流式樣本接收注意事項
①細胞凋亡
需要活細胞(外地樣本不接)。如果細胞帶熒光，一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注，否則按照無熒光處理。如果因此導致檢測結果不可用及樣本浪費，我方概不負責，也不接受退單。
②細胞周期
周期需要細胞量比較多，6 孔板送樣要求匯合度在70%以上，但不能超過90%。外地樣品，需用預冷的70% 乙醇固定過夜后（貼壁細胞需要消化后進行固定），離心棄固定液，加1ml PBS重懸，封口膜封好，4℃運輸寄到實驗室。
③流式JC-1
需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個空白孔，做陰性和陽性對照。如果細胞帶紅光或綠光，不能檢測。
④ 流式ROS
需要活細胞(外地樣本不接)。細胞匯合度高于70%(6 孔板)，多提供2 個空白孔，做陰性和陽性對照。如果細胞帶綠光，不能檢測。
⑤細胞表抗
提前確定公司是否有相應流式抗體(組化抗體不可用)，其他抗體需要客戶自己提供(外地樣本不接)。
⑥ 流式三標
提前告知樣本具體數量和類型(血液或脾臟~)。血樣用抗凝管收集(胞內染色至少需要1.5 ml，表抗需要約1 ml)，注意防止凝血，4℃保存運輸。血樣4℃保存最多只能存放一周，時間越久實驗結果越差。取血后，需盡快寄到實驗室;取脾臟時盡量將動物帶到實驗室，直接在實驗室取材后開始實驗，若不能將動物帶到實驗室，取材(整個脾臟)后將組織放在含有PBS 的EP 管或離心管中，4℃保存，提細胞必須在取材后6 小時以內完成，注意有些檢測指標(Treg,TH1, TH2 等)需無菌提取。外地樣本不接。